Intropica
Evaluación de la germinación del polen de Zea mays a través de metodologías in vitro en Santa Marta, Colombia
Artículo de investigación científica y tecnológica

Evaluación de la germinación del polen de Zea mays a través de metodologías in vitro en Santa Marta, Colombia

Rafael Segundo Escobar Pallares+ , Catherine Pardey Rodriguez+

Rafael Segundo Escobar Pallares
Programa de Ingeniería Agronómica, Facultad de Ingeniería, Universidad Magdalena
Catherine Pardey Rodriguez
Programa de Ingeniería Agronómica, Facultad de Ingeniería, Universidad Magdalena
https://orcid.org/0000-0003-4644-7273
DOI: 10.21676/23897864.3565

Resumen

La viabilidad del polen es un parámetro fundamental en la formación de la semilla, existen diferentes técnicas para su evaluación, de las cuales la germinación in vitro, presenta resultados confiables. El polen de maíz tiene dificultad para germinar en medios de cultivo debido a la morfología y fisiología. Este estudio, tuvo como objetivo evaluar cinco formulaciones de germinación in vitro sobre polen de maíz del híbrido Synko sembrada bajo las condiciones climáticas de la ciudad de Santa Marta-Colombia. El periodo de antesis se dio 50 días después de la siembra; los granos de polen recolectados fueron puestos de inmediato, sobre cinco medios de cultivo ya referenciados en maíz, los cuales están constituidos por diferentes formulaciones de agar - agar, sacarosa, nitrato de calcio y ácido bórico. El arreglo estadístico fue un diseño completo al azar, ocho repeticiones por tratamiento y dos replicas en el tiempo. El conteo de granos de polen viables se hizo sobre cuatro campos por caja de petri, sobre 50 granos por campo, para el conteo, se empleó un estéreo microscopio Leica M205, y en un microscopio compuesto de luz a 40X. Se utilizó como referencia de viabilidad la tinción con acetocarmin al 2 %, en 10 portaobjetos por réplica, 100 granos de polen por portaobjetos. El medio constituido por 0,6 % de agar-agar, 17 % de sacarosa, y 0,03 % de nitrato de calcio, registró los valores más alto de germinación de granos de polen; este fue de 70,13 %. La tinción del polen con acetocarmin superó los porcentajes de viabilidad in vitro.

Palabras clave

viabilidad del polen; medio de cultivo; tinción de polen; hibrido Synko

Introducción

El maíz es una de las gramíneas más cultivadas en el mundo y es una de las especies más productivas (Federación Nacional de Cultivadores de Cereales, 2010). Colombia registra rendimiento promedio de maíz amarillo tecnificado de 5,8 Ton/ha (Fenalce, 2019). La calidad del polen es una variable que influye en la calidad y cantidad de semilla, y es utilizado para realizar estudios relacionados con la biología de la polinización, ya que existen procesos de mejora genética y de producción de cultivos que depende de la espiga macho (MacRobert et al., 2015). El concepto “calidad de polen” se refiere a viabilidad y/o germinación; “viabilidad” se define como la capacidad que tiene un grano de polen de vivir, germinar, crecer, y desarrollarse; y “germinación de polen” como la capacidad del polen de emitir el tubo polínico en condiciones adecuadas (Rejón García et al., 2010; Sorkheh et al., 2011). La viabilidad puede ser medida, a través de la germinación in vitro e in vivo (Corazza Kaefer et al., 2016). La técnica de germinación in vitro, es considerada confiable, exacta y simple (Araméndiz Tatis et al., 2013). Según Vieira de França et al. (2009) la técnica de germinación in vitro presenta ventajas frente a las tinciones tradicionales y los ensayos de actividad enzimática, debido a que estas dos últimas pueden arrojar falsos positivos de viabilidad, al detectar elementos celulares y enzimas funcionales, los cuales no garantizan que el polen sea viable.

La germinación in vitro en medio de cultivo es una técnica que simula, las condiciones del estigma, induciendo la germinación del tubo polínico (Almeida et al., 2011; Corazza Kaefer et al., 2016). El estigma puede ser considerado como una estructura modificada para la captura y recepción del polen, que confiere un medio óptimo para que tenga lugar la germinación del grano y el crecimiento del tubo polínico. Durante este proceso, una gran cantidad de agua y nutrientes junto a otras moléculas son transportadas al interior del grano de polen, bien sea desde el exudado estigmático, en caso de estigmas húmedos, o de las papilas estigmáticas, en caso de estigmas secos, como es el caso del polen de maíz (Arco Alcaraz, 2009; Hui Xu et al., 2012). En la interacción entre el polen y el estigma existen diferentes macromoléculas como carbohidratos, sustancias pépticas y lípidos, necesarios para la fertilización (Arco Alcaraz, 2009; Hui Xu et al., 2012). La composición y el pH del medio son factores importantes que afectan la germinación del polen. Se requiere en las angiospermas una fuente de carbono, boro y a menudo otros nutrientes para promover las condiciones necesarias para que se dé la germinación del tubo polínico (Vieira de França et al., 2009). Cada especie requiere formulaciones específicas de medios de cultivo para obtener buena germinación de granos de polen (Corazza Kaefer et al., 2016). Se han desarrollado medios y procedimientos para la germinación de polen in vitro en numerosas especies; sin embargo, la germinación artificial en las gramíneas ha resultado laborioso (Pfahler, 1967).

El polen de maíz presenta una estructura tri-celular, que lo hace de difícil manejo y almacenamiento (Youmbi et al., 2005). Este tipo de polen presenta dificultad al ser sometido a la germinación in vitro y tiene una tasa de conservación escasa, porque su metabolismo no se detiene después de ser desprendido de la planta (Youmbi et al., 2005). Todos estos aspectos mencionados, y dada la necesidad de conocer la calidad del polen para producir semilla de maíz en condiciones de laboratorio, el presente trabajo tuvo como objetivo evaluar cinco formulaciones de germinación in vitro reportadas sobre polen de maíz en el híbrido Synko (Syngenta) crecido bajo las condiciones climáticas de suelo y ambiente del Centro de Desarrollo Agrícola y Forestal de la Universidad del Magdalena (C.D.A.F) ubicado en Santa Marta, Colombia

Materiales y métodos

Área de estudio, establecimiento y desarrollo del cultivo

Se sembró el híbrido Synko dentro de las instalaciones de la Universidad del Magdalena, en el Centro de Desarrollo Agrícola y Forestal de la Universidad del Magdalena (C.D.A.F), ubicado en la ciudad de Santa Marta, en el departamento del Magdalena (Colombia), localizada, entre los 74°07'y 74°12' de longitud 11° 11' 0,9" y 11° 13' 29,6" de latitud. La textura del suelo es franco arcillo arenoso (Pardey-Rodríguez, 2015).

Se realizaron dos siembras consecutivas, con diferencias de 15 días entre ellas, hasta cubrir un área de 770 m2; 11 surcos de 70 metros de largo con distancias entre surco de 0,8 m y entre planta de 0,50 m. El suelo se preparó con un pase de arado y uno de rastrilla, se fertilizó con una mezcla de 17-6-18-2 (nitrógeno, fósforo, potasio y magnesio) en una dosis de 35 gramos/planta antes de la floración del cultivo. Se realizó un control de malezas 15 días después de la siembra, enmarcado en un plateo manual con guadaña entre los surcos hasta desmalezar toda el área requerida. Para el control de larvas de Lepidoptera, se realizaron dos aplicaciones con 80 g de Bacillus thuringuiensis y 24 ml de Carrier diluídos, entre los 15 y 20 días posterior a la siembra, utilizando una bomba de espalda con capacidad de 20 L, las aplicaciones se hicieron entre las 6:00 t 7:00 am. Se realizó un mejorado, un mojado completo del cogollo de la planta por hileras hasta cubrir el lote, luego se efectuó una segunda aplicación ocho días después. Lo anterior, con el fin de no inactivar el producto por los rayos solares y coincidir con la hora de ingestión de las larvas (figura 1).

Figura 1.Lote de maíz híbrido Synko en centro de desarrollo agrícola y forestal de la Universidad del Magdalena en Santa Marta, Colombia.

Recolecta del polen

La recolecta del polen se realizó dos veces, teniendo en cuenta el periodo de antesis. Al momento de la recolecta de polen, se registró la humedad relativa y la temperatura ambiental con un higrotermómetro digital modelo L101. El polen se almacenó en bolsas de papel recubiertas con cera, la espiga se ubicó dentro de la bolsa, y por medio de golpes suaves, se dio el desprendimiento del polen dentro de ella, se tomó polen de 10 a 12 espigas, luego se transportó de inmediato al laboratorio para evitar la deshidratación.

Evaluación de la germinación del polen de maíz

Se evaluó el efecto de cinco medios de cultivos previamente reportados en maíz. Constituidos por una combinación de diferentes concentraciones de agar-agar al 0,6, 0,7 y 1 %, sacarosa al 10, 15, 17, 20 y 25 %, ácido bórico al 0,01, 0,03 y 0,04 %, nitrato de calcio al 0,025, 0,01, 0,03 %, cada tratamiento corresponde a un medio de cultivo evaluado (tabla 1).

Tratamiento Agar -agar (%) Sacarosa (%) Ácido bórico (%) Nitrato de Calcio (%) Fuente
Medio de cultivo 1 1 10 0,03 0,025 Bair y Loomis, 1941 citado por Alcaraz, 2009
Medio de cultivo 2 1 20 0,04 - Pfahler, 1981
Medio de cultivo 3 0,7 15 0,01 0,01 Almeida et al., 2011
Medio de cultivo 4 0,6 17 - 0,03 Almeida et al., 2011 y Corazza Kaefer et al. ,2016
Medio de cultivo 5 0,6 25 - - Corazza Kaefer et al., 2016
Tabla 1.Descripción de cinco medios de germinación de polen de maíz del híbrido Synko.

La preparación de las mezclas de cada componente del medio de cultivo se realizó adicionando y calentando cada uno de ellos, evitando la ebullición de la mezcla, hasta alcanzar una disolución de los componentes de acuerdo con cada uno de los cinco tratamientos. En elautoclave se esterilizaron los medios y las cajas de Petri, ambos envueltos en papel Kraft. Los medios de germinación se prepararon con un día de anticipación a la siembra del polen, se sirvieron, marcaron e identificaron las cajas de Petri de acuerdo con el tratamiento correspondiente.

La siembra del polen en las cajas de Petri, se hizo con una aguja de disección, se distribuyó el polen en cuatro campos, luego se selló con papel Parafilm y las cajas de Petri se ubicaron por dos horas a una temperatura entre 25 y 27°C, en oscuridad con una humedad relativa del 78 % (Almeida et al., 2011; Corazza Kaefer et al., 2016).

Análisis estadístico

Se aplicó un diseño completamente al azar con cinco tratamientos. Cada réplica se conformó por ocho cajas de Petri donde se realizaron cuatro conteos por caja, sobre 50 granos de polen cada uno. El porcentaje de granos de polen germinados se calculó como el cociente del número de granos de polen germinados en cada campo óptico, con relación al total de 50 granos de polen en el mismo campo (Araméndiz Tatis et al., 2013; Cerovic et al., 2014; Corazza Kaefer et al., 2016).

El conteo se realizó con la ayuda del estéreo-microscopio Leica M 205 y en el microscopio compuesto de luz 40 X. Como testigo de viabilidad de polen se utilizó la prueba de tinción, en la que se tomó polen recién recolectado, se pasó a 10 portaobjetos por repetición y se les añadió una gota de acetocarmin al 2 %. Después de 24 h se observó el polen en el estéreo - microscopio LEICA M205; para su evaluación se trazaron campos que ayudaron a realizar el conteo. El polen se determinó observando su forma; los granos de polen redondeados y teñidos de rojo se consideraron como polen viable, mientras el polen no viable presentó forma constreñida y sin tinción. El término ”constreñidos” hace referencia a los granos de polen que tienen deformación del citoplasma (González et al., 2002). Posteriormente se estimó el porcentaje de viabilidad, dato que sirvió como parámetro de comparación de la viabilidad conseguida por el método de germinación in vitro.

% viabilidad= (Nº de granos bien formados y teñidos)/(N° total de granos)

Para identificar si existen diferencias en los medios de cultivo se realizó un análisis de varianza y para elegir el mejor tratamiento que favoreció la germinación del polen se realizó una comparación de medias empleando la prueba de rangos múltiples Duncan a 5 % de significancia estadística. Se utilizó el programa estadístico Statgraphics Centurion XVI.I.

Resultados

La germinación del híbrido Synko (Syngenta) se dio en promedio a los siete días después de la siembra (DDS); la floración a los 45 DDS. La emisión de polen comenzó a los 50 DDS. La temperatura al momento de la colecta fue de 25,2 y 27,5 °C y La humedad relativa de 79 y 78 %, para la primera y segunda cosecha respectivamente. La siembre de los granos de polen tomados dos horas después de recolectado y conservado a 4° C por 24 h, no logró germinar en ningún medio de cultivo probado (datos no registrados). La germinación del polen en los cinco tratamientos se observó después de colectados e inmediatamente sembrados sobre cada medio de cultivo como se muestra en la figura 2.

El promedio de germinación de cada tratamiento se muestra en la tabla 2; en todos los cinco medios referenciados germinaron granos de polen así se muestra en los valores mínimos; se presentaron valores máximos de germinación de 80 y 100 % en los tratamientos 1, 3 y 4; los cuadrantes de lectura mostraron variaciones entre ellos como se evidencia en los coeficientes de variación.

Figura 2.Polen de maíz evaluado en diferentes medios por la técnica de germinación in vitro. (1). Medio 1. (2) Medio 2. (3) Medio 3. (4) Medio 4. (5) Medio 5. (6). Determinación de viabilidad por la técnica de tinción con acetocarmin.

Los porcentajes de germinación de polen in vitro del híbrido Synko mostró diferencias (P˂0,05) entre las cinco formulaciones (tabla 3). La mejor formulación para el híbrido Synko fue en el tratamiento Cuatro, constituido por 0,6 % de agar - agar, 17 % de sacarosa, 0,03 % de nitrato de calcio y sin adición de ácido bórico mediante el cual se obtuvo 70,13 % de germinación como se muestra en la tabla 2.

La comparación entre la técnica de germinación de polen con la técnica de tinción, evidenció que los porcentajes de viabilidad fueron mayores al teñir el polen que al inducir su germinación a través de los cinco medios de cultivos (figura 2).

Tratamiento Recuento Promedio D.E CV (%) Min Máx
Medio de cultivo 1 64 32,62 16,77 51,42 2,0 80,0
Medio de cultivo 2 64 12,87 3,52 27,38 6,0 20,0
Medio de cultivo 3 64 26,37 15,04 57,03 8,0 80,0
Medio de cultivo 4 64 70,13 18,96 27,04 30,0 100,0
Medio de cultivo 5 64 9,187 3,80 41,36 4,0 20,0
Tinción 20 96,25 1,83 1,90 93,0 99,0
Tabla 2. Porcentaje de germinación del polen del hibrido Synko de maíz para cada tratamiento y medidas de viabilidad con la técnica de tinción. Los números muestran las variaciones con respecto a la media y la representación de esta entre cada tratamiento y la técnica de tinción. D.E= desviación estándar, CV= coeficiente de variación, Min=mínimo y Máx=máximo.
Fuente SC Gl CM Razón-F Valor-P
Tratamiento 37699,1 4 9424,76 210,76 0,0000
Error 14086,4 315 44,7188
Total 51785,5 319
Tabla 3.Análisis de varianza para el porcentaje de germinación de polen del hibrido Synko de maíz, sobre cinco tratamientos analizados en un diseño completamente al azar. SC= suma de cuadrados, Gl= grados de libertad, CM= cuadrado medio.

Discusión

La floración del híbrido Synko producida por Syngenta se dio después de los 50 DDS. Las variables de temperatura y humedad coinciden con un clima seco. Los granos de polen maíz viables puede durar entre 18 y 24 h viables en ambientes frescos. De ahí que bajo las condiciones de la granja donde se hizo la siembre de maíz, una vez recolectado el polen debe ser sembrado en los medios de cultivo de inmediato y puesto en ambientes fresco. Corazza Kaefer et al. (2016), registraron que las variables climáticas influyen en la germinación del polen en el medio de cultivo porque afectan el estado de turgencia de la membrana del grano de polen.

Corazza Kaefer et al., 2016, además afirman que una hora fija no es relevante para influenciar en la tasa de germinación sino los factores de humedad relativa y la temperatura, las cuales deben ser de 72 % y 27,2 °C respectivamente, así no se afectarían los resultados de germinación.

Youmbi et al., 2005 comprobaron que el polen de maíz tiene características especiales que dificultan su germinación al ser trinucleado, el cual presenta una longevidad corta, con una alta tasa de deshidratación, que es regida por la pared de la membrana y una tasa de conservación pobre debido a que su metabolismo es rápido y no se detiene después de ser desprendido de la antera.

Las diferencias encontradas en los tratamientos (tabla 3) fueron discutidos previamente por Youmbi et al., (2005); Davide et al. (2009) y Almeida et al. (2011) quienes señalaron que la germinación del polen en un medio de cultivo de un mismo genotipo puede variar al usar diferentes formulaciones, de ahí que se deban ajustar las concentraciones de los reactivos al genotipo, diseñando un modelo estadístico que permita inferir el efecto de la concentración de cada elemento químico que actúa en el medio de cultivo afectando la germinación del grano de polen. En este estudio, la mejor formulación correspondió al tratamiento cuatro, donde se logró 70,13 % de germinación. El reporte de Almeida et al., (2011), muestra 70 % de germinación con la concentración de 17 % de sacarosa; Davide et al., (2009), confirman haber obtenido los mejores resultados al hacer germinar polen de maíz a una concentración de sacarosa 16,5%. Youmbi et al., (2005), con 10 y 15 % de sacarosa. Almeida et al., (2011), utilizando diferentes concentraciones de sacarosa, agar, ácido bórico, y utilizando Cloruro de Calcio hidratado, encontraron que, independientemente de la presencia de calcio o boro en los medios de cultivo, el contenido de sacarosa entre 10 y 20 %, proporciona la germinación más alta, y que la concentración cercana al 10 % es la más indicada para la germinación de polen de maíz. Taylor y Hepler (1997), confirman que la sacarosa en el medio de germinación puede alterar la permeabilidad del crecimiento del tubo polínico, resultando en la lixiviación de metabolitos e iones al medio. Vieira de França et al. (2009) ; Almeida et al. (2011) y Jankovic et al. (2014) coinciden también en que la sacarosa estimula la fermentación del etanol durante el crecimiento in vitro y se acumula a niveles de 100 mM que inhibe el crecimiento; sugieren probar otros azúcares como la glucosa o fructosa que reducen la hidrólisis en el tejido; además, proporcionan la energía para el desarrollo del tubo polínico y provee un balance osmótico entre el polen y la solución de germinación influenciado por otras sustancias como el ácido bórico y el calcio. Es por eso, concentraciones excesivas o deficientes de cualquiera de estas sustancias pueden prevenir o dificultar la germinación del grano de polen.

Bohórquez et al. (2013) encontraron que el boro en las monocotiledóneas es requerido en pequeñas cantidades con relación a las dicotiledóneas. Por tanto, la cantidad óptima de Boro para algunas especies, puede ser tóxica para otras Martínez et al. (2009) azúcares del boro es un elemento requerido para el transporte de azúcares entre muchas otras funciones; una deficiencia de él causa deterioro en el crecimiento de los puntos meristemáticas, de ahí que las concentraciones correctas permitirán el desarrollo del crecimiento del tubo polínico. Pfahler (1967), reportó que los mejores resultados de germinación en polen de maíz los alcanzó con concentraciones de 0,01% de ácido bórico. Schreiber y Dresselhaus (2003), demostraron que al variar concentraciones al ácido bórico de 0,02 a 0,025 %, pueden obtener resultados diferentes en el porcentaje de germinación del polen de maíz, los mejores resultados son superiores al 90 % de germinación usando una concentración de 0,005 % de ácido bórico.

Pfahler, (1967) y Almeida et al. (2011) consiguieron los mejores resultados de germinación de polen de maíz a una concentración de calcio 0,03%. Los estudios han indicado que la unión de calcio toma lugar en las regiones pépticas de la pared del tubo de polen, lo que aumenta la rigidez de la pared y la estabilidad con una disminución en la ruptura. El calcio es un medio de cultivo que proporciona características fisiológicas al tubo polínico y al grano de polen, dándole menor sensibilidad a los cambios en el medio básico, menor permeabilidad, crecimiento en un aspecto lineal y rígido del tubo polínico. La acción del calcio sobre el grano de polen está aparentemente asociada con la membrana del tubo polínico. Por lo tanto en ausencia de calcio hay una mayor permeabilidad de la membrana del tubo polínico, provocando la liberación de metabolitos internos al medio externo (Vieira de França et al., 2009). Lo anterior demuestra que hay que estandarizar cada uno de los elementos del medio de cultivo para igualar o superar la germinación obtenida del polen de maíz en el híbrido Synko.

Conclusiones

La germinación del grano de polen del híbrido Synko (Syngenta) se logra en los medios de cultivo referenciados por otros autores en maíz bajo las condiciones agroecológicas de la granja de la Universidad del Magdalena. La siembra en los medios de cultivo de los granos de polen no debe pasar por etapas previas de almacenamiento.

Agradecimiento

Los autores expresan sus agradecimientos al grupo de Investigación Fitotecnia del Trópico, perteneciente a la Universidad del Magdalena por la financiación del proyecto.

Citas

Alcaraz, M. L. 2009. Biología reproductiva del aguacate (Persea americana Mill). Implicaciones para la optimización del cuajado. Tesis de doctorado. Universidad de Málaga, Málaga, España.
Almeida, C., do Amaral, A. L., Barbosa Neto, J. F. and De Melo Sereno, M. J. C. 2011. Conservação e germinação in vitro de pólen de milho (Zea mays subsp. mays). Revista Brasileira de Botanica 34(4), 493–497. Doi: https://doi.org/10.1590/s0100-8404201100040000.
Araméndiz Tatis, H., Cardona Ayala, C. y Jarma Orozco, A. 2013. Eficiencia de dos métodos para evaluar la viabilidad del polen de berenjena (Solanum melongena L. cv. Lila criolla). Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgación Científica 16(2): 351–358. Doi: https://doi.org/10.31910/rudca.v16.n2.2013.907.
Bohórquez, W., Gómez, J. y Flórez, V. 2013. Nutritional factors and modification in the content of anthocyanins associated with the blackening of rose petals (Rosa sp.). Revista U.D.C.A Actualidad & Divulgación Científica, 16(1): 103–112. https://doi.org/Doi:10.31910/rudca.v16.n1.2013.864.
Cerovic, R., Pajic, Z., Filipovic, M., Fotiric-Akšic, M., Radicevic, S., Nikolic, D. y Dordevic, M. 2014. Pollen germination and pollen tube growth in ZP maize lines. Genetika 46(3): 935–948. https://doi.org/10.2298/GENSR1403935C.
Corazza Kaefer, K. A., Chiapetti, R., Fogaca, L., Luis Muller, A., Borghetti Calixto, G. y Dall´Olglio, E. I. 2016. Viability of maize pollen grains in vitro collected at different times of the day. African Journal of Agricultural Research 11(12): 1040–1047. Doi: https://doi.org/10.5897/ajar2015.10181.
Davide, L. M. C., Pereira, R. C., Abreu, G. B., Souza, J. C. y Pinho, É. V. R. V. (2009). Viabilidade de Pólen de Milho em Diferentes Períodos de Armazenamento em Baixa Temperatura. Revista Brasileira de Milho e Sorgo 8(2): 199–206. https://doi.org/10.18512/1980-6477/rbms.v8n2p199-206
Federación Nacional de Cultivadores de Cereales. 2010. El cultivo del maíz, historia e importancia. Url: http://hdl.handle.net/20.500.12324/1004 . Consultado: 10 de agosto de 2020.
Fenalce. 2019. Estadística. URL: https://www.fenalce.org/alfa/pg.php?pa=60. Consultado: 10 de agosto de 2020.
González, M., A. Estévez, J. Castillo, J. Salomón, O. Moré y M. Hernández. 2002. La Calidad del polen: requisito indispensable del mejoramiento tradicional de la papa en Cuba. Revista Latinoamericana de la Papa 13(1): 75-94.
Hui Xu, X., Chen, H., Lin Sang, Y., Wang, F., Ping Ma, J., Gao, X.-Q. y Sheng Zhang, X. 2012. Identification of genes specifically or preferentially expressed in maize silk reveals similarity and diversity in transcript abundance of different dry stigmas. BMC Genomics 13(294): 2–17. Doi: https://doi.org/https://doi.org/10.1186/1471-2164-13-294.
Jankovic, D., Jankovic, S., Paunovic, S., Cirkovic, B. y Zaran, N. 2014. Effect of different concentrations of agar, sucrose, boric acid and calcium chloride on pollen germination in english walnut cultivar ‘geisenheim 251.’ International Journal of Biosciences (IJB) 1: 217–223. https://doi.org/10.12692/ijb/4.7.217-223.
MacRobert, J. F., Setimela, P., Gethi, J. y Worku Regasa, M. 2015. Manual de producción de semilla de maíz híbrido. CIMMYT. México, D.F.
Martínez, F.E., Sarmiento, J., Fischer, G. y Jiménez, F. 2009. Síntomas de deficiencia de macronutrientes y boro en plantas de uchuva (Physalis peruviana L.). Agronomía Colombiana 27(2): 169–178.
Pardey Rodríguez, C. 2015. Seed production and crosses among maize (Zea mays L.) accessions of the Magdalena department of Colombia. Acta Agronomica 64(1): 82–91. Doi: https://doi.org/10.15446/acag.v64n1.44551.
Pfahler, P.L. 1967. In vitro germination and pollen tube growth maize (Zea mays L.) pollen: Calcium and boro effects. Canadian Journal of Botany 45(6), 839–845. Doi: https://doi.org/10.1139/b67-087.
Pfahler, P.L. 1981. In vitro germination characteristics of maize pollen to detect biological activity of environmental pollutants. Environmental Health Perspectives 37:125–132. Doi: https://doi.org/10.1289/ehp.8137125.
Rejón García, J., Suárez Rizzo, C., Alché Ramírez, J., Castro López, A. y Rodríguez-García, M. 2010. Evaluación de diferentes métodos para estimar la calidad del polen en distintos cultivares de olivo (Olea europaea L.). Polen 20: 60–72. Doi: https://doi.org/10.14201/pol.v20i0.8921.
Schreiber, D. N. y Dresselhaus, T. 2003. In vitro pollen germination and transient transformation of Zea mays and other plant species. Plant Molecular Biology, 21(3): 31–41. Doi: https://doi.org/10.1007/BF02772809.
Sorkheh, K., Shiran, B., Rouhi, V., Khodambashi, M., Wolukau, J. N. y Ercisli, S. 2011. Response of in vitro pollen germination and pollen tube growth of almond (Prunus dulcis Mill.) to temperature, polyamines and polyamine synthesis inhibitor. Biochemical Systematics and Ecology 39(4–6): 749–757. Doi: https://doi.org/10.1016/j.bse.2011.06.015 .
Taylor, L.P. y Hepler, P. K. 1997. Pollen germination and tube growth. Annual Review of Plant Physiology and Plant Molecular Biology 48(1): 461–491. https://doi.org/10.1146/annurev.arplant.48.1.461.
Vieira de França, L., Nascimiento, W. M., Carmona, R. and Alves de Freitas, R. 2009. Viability of eggplant pollen. Cropp Breeding and Applied Biotechnology 9(4): 320–327. Doi: https://doi.org/10.12702/1984-7033.v09n04a06.
Youmbi, E., The, C. y Tedjacno, A. 2005. Conservation of the germination capacity of pollen grains in three varieties of maize (Zea mays L.). Grana, 44(3): 152–159. Doi: https://doi.org/10.1080/00173130500233271.

Cómo citar

Escobar Pallares, R. S. ., & Rodriguez, C. P. (2021). Evaluación de la germinación del polen de Zea mays a través de metodologías in vitro en Santa Marta, Colombia. Intropica, 15(2), 137–143. https://doi.org/10.21676/23897864.3565 (Original work published 9 de diciembre de 2020)
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