TITULO CORTO: CONTEO DE PLAQUETAS EN SUJETOS SANOS

Para citar este artículo: González-Rincón M, Arteaga-Vizcaíno M, Ruíz A, Briceño O, Quintero M, Quintero J, et al. Conteo de plaquetas en sujetos sanos tratados con antiagregantes plaquetario. Duazary. 2016 julio; 13 (2): 87 - 94

RESUMEN

Se evaluó el recuento plaquetario en sangre periférica de sujetos sanos tratados con antiagregantes plaquetarios. Se analizaron 20 sujetos. Se distribuyeron en dos grupos: A: 10 sujetos que recibieron Aspirina (100 mg) y B: 10 con Clopidogrel (75 mg) por 7 días. Se les realizó recuento plaquetario en sangre periférica y en PRP. Encontrándose un conteo de plaquetas antes del tratamiento con antiagregantes en sangre periférica de 258,6 ± 54,46 x 109 l 7 días después de 254 ± 41,86 x 109 l (Aspirina), 285,4±70,92 y 196,5±37,90 x 109 l (Clopidogrel) respectivamente. En el PRP de los sujetos antes de recibir Aspirina fue 486,5 ± 129,54 x 109 l y después 449,2 ± 85,51 x 109 l; antes de la ingestión de Clopidogrel fue 565,2 ± 150,41 y 592,9 ± 203,46 x 109 l después del tratamiento. Se encontraron diferencias significativas solo para el conteo plaquetario en el grupo del Clopidogrel (p< 0.05). Se observó una disminución significativa del conteo plaquetario en sangre periférica posterior a la administración del Clopidogrel, posiblemente como consecuencia del mecanismo farmacológico del mismo. Son necesarios más estudios para evaluar un mayor número de individuos y medir mejor el efecto de los antiplaquetarios.

Palabras clave: Plasma rico en plaquetas; Aspirina; Clopidogrel.

PLATELET COUNT IN HEALTHY SUBJECTS TREATED WITH ANTIPLATELET DRUGS

ABSTRACT

Platelet count in peripheral blood of healthy subjects with antiplatelet drugs. 20 subjects were analized. They were distributed in two groups: subject A: 10 who received aspirin (100 mg) and B:10 with Clopidogrel (75 mg) for 7 days. In all subjects studied platelet count in peripheral blood and PRP. It found a platelet count before treatment with antiplatelet agents in peripheral blood of 258,6 ± 54,46 x 109 l and 7 days after 254 ± 41,86 x 109 l (aspirin) and 285,4 ± 70, 196,5 ± 37,90 x 109 l (Clopidogrel) respectively. In the PRP of subjects before receiving aspirin was 486,5 ± 129,54 x 109 l and after 449,2 ± 85,51 x 109 l; prior to Clopidogrel ingestion was 565,2 ± 150,41 and 592,9 ± 203,46 x 109 l after treatment. Significant differences were found only for the platelet count in the Clopidogrel Group (p < 0.05). A significant decrease in platelet count was observed in peripheral blood after administration of Clopidogrel, possibly as a result of its pharmacological mechanism. More studies are needed to assess a greater number of individuals and better measure the effect of antiplatelet agents.

Keywords: Platelet-Rich Plasma; Aspirin; Clopidogrel

INTRODUCCIÓN

Las plaquetas son fragmentos citoplasmáticos provenientes de los megacariocitos de la médula ósea, sin núcleo y por ende tampoco ADN genómico, sin embargo, contienen ARN mensajero derivado de sus predecesores inmediatos, que lleva a cabo la síntesis de las proteínas. Tienen forma discoide, con dimensiones de 2 a 4 por 0,5 μm, circulan en concentraciones de 150-450 plaquetas x 109 l; el 70% se mantiene en circulación mientras que el otro 30% permanece de manera transitoria, pero constante, en el bazo y en la circulación por un promedio de 10 a 11 días¹. Contienen gránulos secretorios como los α, que determinan su valor funcional por las sustancias que se segregan una vez que las plaquetas han sido activadas. También poseen una alta concentración de factores de crecimiento (FCs), que ha llevado a considerar el uso de Plasma Rico en Plaquetas (PRP) como potenciador de los mecanismos de regeneración tisular, sin producir efectos negativos^2-4.

El PRP es una fracción plasmática con altas concentraciones de plaquetas, de 2 a 5 veces su número en sangre periférica, cuyo valor promedio es alrededor de 200 plaquetas x 103 /μl. Una concentración de 1.000 x 103/ μl plaquetas, es ideal para asegurar un aporte óptimo de FCs y estimular la consolidación de huesos y tejidos blandos⁵. En ese sentido, se han realizado diversos estudios para determinar el recuento plaquetario tanto en sangre periférica como en PRP, para establecer el porcentaje de recuperación plaquetaria en cada producto; sin embargo, poco se ha estudiado de manera exhaustiva, sobre cómo se afecta este conteo en sujetos bajo tratamiento con antiagregantes plaquetarios^6,7. Hoy día, la aterogénesis y trombogénesis arterial es tema de estudio de todas las especialidades relacionadas con el diagnóstico, tratamiento y prevención de las enfermedades aterotrombóticas⁸, y entre los medicamentos empleados están los antiagregantes plaquetarios.

Los conocimientos obtenidos acerca de la estructura, ultraestructura y características funcionales plaquetaria, han permitido una mejor comprensión de su fisiología, así como la acción de fármacos con función antiagregantes, tan antiguo como la Aspirina (Ácido Acetil Salicilico-AAS), y otras nuevas drogas como las Ticlopidina, Tienopiridinas, un derivado de esta última es el Clopidogrel. La AAS y el Clopidogrel, son los antiagregantes plaquetarios que han sido recomendados para reducir el riesgo de eventos vasooclusivos recurrentes en pacientes con enfermedad cardiovascular⁹.

La AAS inhibe la formación de tromboxano A2 en la plaqueta y de Prostaciclina en el endotelio vascular; y el Clopidogrel actúa inhibiendo los receptores plaquetarios del ADP⁹. La acción de estas drogas se mantiene durante toda la vida de la plaqueta (8-10 días)¹⁰; la AAS no ejerce un efecto antiplaquetario uniforme en todas las plaquetas pues su acción está sujeta a variables individuales (factores clínicos, celulares y genéticos)¹¹. Aun cuando la tolerancia para ambas drogas es similar, las hemorragias gastrointestinales son menos frecuentes con el Clopidogrel⁸.

En pacientes tratados con Clopidogrel o aspirina, se ha reportado una variedad de efectos hematológicos en sangre periférica que incluyen trombocitopenia^12,13. En estudios previos también se ha evidenciado disminución significativa del conteo plaquetario después de administrar Clopidogrel en una sola dosis⁷, pero siempre manteniéndose dentro de valores considerados como normales. Otros investigadores sin embargo han reportado modificaciones sobre los leucocitos y eritrocitos, pero no sobre las plaquetas⁶.

Dado que las plaquetas tienen una alta concentración de FCs que pueden utilizarse para acelerar los procesos de regeneración tisular cuando sea requerido por el paciente, el estudio de la acción de los antiagregantes plaquetarios y su relación con el recuento plaquetario, permitirá inferir si estos medicamentos modifican la cantidad de plaquetas de manera importante, que dificulten el empleo del PRP en pacientes que reciben estos medicamentos. De allí que el objetivo de esta investigación fue evaluar el recuento plaquetario en sujetos sanos tratados con antiagregantes plaquetarios durante 7 días.

MATERIALES Y MÉTODOS

Tipo y Diseño de investigación

Esta es una investigación descriptiva, de campo, no experimental y longitudinal¹⁴.

Población y muestra

Estuvo conformada por sujetos adultos, de sexo femenino y masculino, atendidos en la consulta de medicina general del Instituto de Investigaciones Clínicas (IIC) de La Universidad del Zulia, Venezuela, durante el periodo febrero del 2014 a febrero del 2015. La muestra fue de tipo no probabilístico, de conveniencia o intencional¹⁵.

Criterios de selección

Se incluyeron sujetos entre 18 y 50 años de edad, de ambos sexos, que desearon participar en este estudio, sin enfermedad clínica de base conocida, aparentemente sana (previa valoración clínica general) y con resultados normales en el estudio de agregación plaquetaria antes del tratamiento con antiagregantes plaquetarios y finalmente que acataron de manera estricta el tratamiento con los antiagregantes indicados. Fueron excluidos aquellos que habían ingerido previamente antiagregantes plaquetarios o bebidas alcohólicas 11 días antes del estudio, o que estuvieran recibiendo cualquier tipo de tratamiento.

Procedimiento

Se incluyeron 20 sujetos, 13 femeninos y 7 masculinos, y se distribuyeron en dos grupos, de la siguiente manera: Grupo A: 20 sujetos sin tratamiento previo con drogas antiagregantes plaquetarias; estos mismos conformaron el Grupo B, pero que a su vez fueron divididos en dos subgrupos: B1: 10 sujetos tratados con Aspirina a una dosis de 100 mg diarios por 7 días y B2: 10 individuos quienes recibieron Clopidogrel a una dosis de 75 mg diarios por 7 días.

Los sujetos debían encontrarse en ayunas, se les extrajo por punción venosa 16 ml de sangre, empleando catéter pericraneal N° 21 siguiendo la técnica de la doble jeringa para evitar la activación de las plaquetas¹⁶. Se empleó una jeringa con la cual se extrajo 2,5 ml de sangre que se trasegó a un tubo de vidrio que contenía EDTA y que se utilizó para hacer el conteo inicial de plaquetas, empleando un contador automático de células sanguíneas marca Beckman Coulter AC-T. La segunda jeringa contenía 13,5 ml de sangre venosa que se distribuyeron en dos tubos plásticos que contenían de citrato de sodio al 3,8% (9/1): en uno se vertió 9 ml y en el otro 4,5 ml; en ambos se realizó estudio de agregación plaquetaria, empleando un agregómetro Chrono-log (Corp. Haverton, PA, USA). En cada una de estas muestras también se realizó el conteo plaquetario.

Los tubos con citrato de sodio, fueron sometidos a centrifugación en centrifuga clínica. El que contenía 9 ml de sangre, se dejó reposar 20 minutos, y luego fue centrifugado a una velocidad de 1.400 rpm por 7 minutos, siguiendo la técnica de Anitua¹⁷. El tubo con 4,5 ml de sangre se sometió a 800 rpm durante 10 minutos a temperatura ambiente. Lo que quedó de cada tubo, se centrifugó de nuevo a 4.500 rpm durante 20 minutos, en centrífuga refrigerada (Sorvall), para obtener Plasma Pobre en Plaquetas (PPP). De igual manera, en estas muestras también se realizó conteo plaquetario.

Se realizó un ajuste de la concentración plaquetaria a 250 x 109/l con el PPP, antes de llevarse a cabo la agregación respectiva y el recuento de plaquetas se ajustó antes del tratamiento con los antiagregantes plaquetarios ya mencionados. Para la realización de la prueba de agregación se empleó el método turbidimétrico de Born¹⁸ y el agregómetro Chrono-log (Corp. Haverton, PA, USA). De manera que a 0,45 ml de las plaquetas ajustadas se les adicionó los siguientes inductores: ADP (Adenosina 5 Difosfato): 5 x 10-6 M (concentración final: 2,14 μg/mlL), colágeno: 1,2 x 10-2M (concentración final: 3 mg/ml) y epinefrina: 0,6 x 10-4M (concentración final: 11 μg/ml). El resultado obtenido se expresó en porcentaje.

Posteriormente, a cada sujeto se le instruyó consumir la dosis correspondiente al antiagregante respectivo: 100 mg de AAS o 75 mg de Clopidogrel en ayunas, por 7 días, al cabo de los cuales se realizó nuevamente la extracción sanguínea para el conteo plaquetario, siguiendo el procedimiento ya descrito.

Valores Referenciales

Se tomaron en cuenta los valores de referencia para el recuento plaquetario entre 150,0 a 450,0 x 109 l en sangre periférica; y un conteo de plaquetas en el PRP de 2 a 5 veces superior al número de plaquetas que se obtuvo en sangre periférica⁵. Mientras que para la agregación plaquetaria en cada agonista utilizado se consideró como valores normales para ADP de 68%-88%, Colágeno entre 70-94% y Epinefrina entre 78 a 88%¹⁹.

Técnicas de procesamiento y análisis de datos

Los datos se muestran en tabla y gráficos. Se aplicó la prueba t student (datos no pareados) para la comparación de medias y para medir el efecto de cada uno de los tratamientos (Aspirina vs Clopidogrel). Así mismo, se empleó la estadística descriptiva para determinar el recuento plaquetario antes y después de los tratamientos. Se trabajó con intervalos de confianza del 95%, por ello se consideró significativo los valores de p < 0,05. Para todos los análisis se utilizó el software estadístico SPSS18^20,21.

Declaración de aspectos éticos

A todos los sujetos objeto de estudio se les informó acerca de los objetivos, detalles procedimentales y alcance de esta investigación, y se les hizo firmar un consentimiento informado por escrito, que conto con la aprobación de la Comisión de Ética de la Institución de investigación y acatando los principios de la declaración de Helsinki de 1975 (actualizada en el 2013)²², y a las recomendaciones elaboradas por el Consejo de Organizaciones Internacionales de Ciencias Médicas (CIOMS) en el 2002²³.

RESULTADOS

Se observa que el contaje de plaquetas fue similar tanto en sangre periférica como en el PRP antes y después del tratamiento recibido (Tabla 1). Se produjo un incremento significativo en el PRP con respecto a la sangre periférica, tanto en condiciones basales como después del tratamiento con este antiagregante (basal p <0,05, postratamiento <0,0001), pero todos los valores se encuentran dentro del rango referencial.

Con respecto a los resultados obtenidos y mostrados en la Tabla 2 en los sujetos tratados con Clopidogrel, se observó una disminución significativa (p <0,05) en sangre periférica después de recibir este antiagregante. Similar al comportamiento del grupo tratado con AAS se observó al comparar el recuento plaquetario de sangre periférica versus PRP (antes y después del tratamiento), pues hubo un incremento significativo tanto en condiciones basales, como postratamiento (Basal: p< 0,05, postratamiento: p<0,0001).

Cuando se comparó el contaje plaquetario en los sujetos tratados con AAS y Clopidogrel tanto en sangre periférica como en PRP, se observó que en condiciones basales mostraron valores similares (Tabla 3), no así posterior al tratamiento, donde se observó una disminución significativa (< 0,005) del recuento plaquetario en sangre periférica en aquellos individuos tratados con Clopidogrel (Tabla 4).

DISCUSIÓN

En la presente investigación se encontró que, antes del tratamiento con AAS y Clopidogrel, el conteo plaquetario en sangre periférica fue 258,60 ± 54,46 x 109/litro y en el PRP 486,50 ± 129,54 x 109/l para el primero; mientras que para el segundo fue 285,40 ± 70,92 x 109 l en sangre periférica y 565,20 ± 150,41 x 109 l en el PRP, observándose diferencia estadísticamente significativa (p< 0,05) en ambos casos. Esto representó un incremento plaquetario de 1,9 veces para la AAS y 1,98 veces para el Clopidogrel. Este comportamiento es el esperado luego de someter la muestra sanguínea a centrifugación utilizando el protocolo de Anitua, de esta manera se obtiene un verdadero PRP con una concentración efectiva de plaquetas, aportando una gran concentración de FCs¹⁷.

Los valores en sangre periférica son similares a los obtenidos por otros autores, entre los que se destaca Weibrich et al24 y Agren et al²⁵; el primero determinó la concentración de factores de crecimiento en el PRP y obtuvieron un conteo plaquetario de 260 ± 57,5 x 103 x mm³, mientras que el segundo cuantificó los factores de crecimiento en el PRF (Plasma Rico en Fibrina: derivado del PRP) y las cifras plaquetarias fueron de 253 ± 47 x 103 x mm³.

Al analizar el comportamiento del contaje de plaquetas en sangre periférica antes y 7 días después del tratamiento con los antiagregantes plaquetarios utilizados, se observó que para la AAS los valores fueron similares (258,60 ± 54,46 x 109/litro versus 254 ± 41,86 x 109/ litro, sin diferencias significativas); mientras que para el Clopidogrel hubo un descenso significativo (p<0,05) (285,40 ± 70,92 x 109/l versus 196,50 ± 37,90 x109/l).

Dichos resultados coinciden con los reportados por González et al7 quienes estudiaron sujetos sanos tratados con Aspirina (100 mg) y Clopidogrel (75 mg) pero en dosis única. No así con los resultados presentados por Fontana et al26, quienes midieron los efectos biológicos de la aspirina y el Clopidogrel en sujetos sanos, no encontrando diferencias significativas en sangre periférica para el recuento plaquetario luego de la administración por una semana de ambos fármacos.

Cuando se enfrentaron los resultados observados para el recuento plaquetario en sangre periférica luego del tratamiento con AAS vs Clopidogrel durante 7 días (254 ± 41,86 x 109 l vs 196,5 ± 37,9 x 109 l, respectivamente) se observó diferencias estadísticamente significativas (p< 0,05), pero no para el PRP, discrepando con lo reportado por González et al.27 para el PRP cuando se utilizaron los tratamientos antes descritos.

Estos hallazgos parecen reafirmar que en nuestra investigación se experimentó una disminución significativa en el recuento plaquetario en la sangre periférica, luego del tratamiento con Clopidogrel durante 7 días, pero esta disminución no se sitúo por debajo del rango referencial (< 150,0 x 109 l), lo que permite inferir que el Clopidogrel pareció afectar el número de las plaquetas primordialmente en sangre periférica pero no en el PRP. Esto podría deberse al recambio plaquetario que se genera en condiciones normales después de la administración de estas drogas, que es de aproximadamente 7 días⁸.

El comportamiento observado en cuanto al conteo plaquetario en sangre periférica en los sujetos tratados con AAS o Clopidogrel, llama la atención sobre el control y vigilancia que se debería llevar a cabo en sujetos con patologías que ameritan de tratamientos con antiagregantes plaquetarios, sobre todo si estos son prolongados. Por ello se requiere de un estudio similar, con un mayor número de individuos.

Existe el falso entendimiento de que los fármacos antiagregantes plaquetarios pueden afectar significativamente tanto el número de plaquetas como su contenido en factores de crecimiento, lo que a su vez alteraría la capacidad regenerativa de este derivado plaquetario utilizado en tratamientos de diversas patologías médicas. Estos resultados indican que las cifras de plaquetas obtenidas en el PRP luego de 7 días de tratamiento con AAS o Clopidogrel, no sufrieron cambios significativos, por lo que puede considerarse el empleo de ese PRP en sujetos tratados con antiagregantes, para acelerar la regeneración tisular en caso de ameritarlo.

En resumen, el presente trabajo permitió evaluar el recuento plaquetario en SP y PRP de sujetos sanos antes y 7 días después de la administración de antiagregantes plaquetarios, hallándose que el AAS no afectó el recuento plaquetario de manera significativa, pero si para el Clopidogrel el cual mostró una disminución significativa en SP 7 días después de su administración encontrándose, sin embargo, dentro del rango referencial. Se recomienda la realización de nuevos estudios con un mayor número de muestras provenientes de sujetos sometidos a tratamiento con diversos antiagregantes plaquetarios.

DECLARACIÓN SOBRE CONFLICTOS DE INTERÉS

Los autores de este manuscrito declaran no tener ningún tipo de conflicto de intereses.

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